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      超純質粒DNA小量提取試劑盒-----去內毒素、去蛋白

GalaxyBio Code包裝規格價格說明書購物車
FP05050420元
FP060100680元

超純質粒DNA小量提取試劑盒-----去內毒素、去蛋白

超純質粒DNA小量提取試劑盒
            (去內毒素、去蛋白)
 

 試劑盒內容
50次 貨號cat:FP050
100次貨號cat:FP060
RNaseA (10mg/ml)  
150ul
300ul
溶液S1    Resuspension Buffer
15 ml
30 ml
溶液S2    Lysis Buffer 
15 ml
30 ml
溶液S3    Neutralization Buffer
25 ml
45 ml
去內毒素S4 Buffer S4
25ml
45 ml
漂洗緩沖液 Wash Buffer
15 ml
30 ml
洗脫緩沖液 Elution Buffer
10 ml
20 ml
吸附柱     Spin Column
50
100
收集管   Collection Tube(2ml)  
50
100
說明書     Specification
1
1

 
貯存條件:
室溫,有效期一年。溶液S1加入RNase后2-8℃保存
 
產品簡介     
※  本試劑盒采用經典的SDS堿裂解法裂解細胞,離心吸附柱內的硅膠膜在高鹽低pH值狀態下選擇性地結合溶液中的質粒DNA,再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它細菌成分去除,最后低鹽,高pH值的洗脫緩沖液將純凈質粒DNA從硅膠膜上洗脫。
  ※  具有高效率的內毒素去除液,有效去內毒素,經檢測,一次分離即符合國家藥典內毒素含量標準。非常適合轉染、轉化及動物免疫及各種分子生物學實驗。
  ※  快速、方便,從1~5 ml大腸桿菌LB(Luria Bertani)培養液中,可快速提取15-40ug純凈的高拷貝質粒DNA,提取率達85~90%。
操作步驟:
1.試驗前準備及注意事項
 a. 溶液S1 Resuspension Buffer 使用前將RNase A全部加入(使用前離心),均勻混合后4℃保存并標示。
     b. Wash Buffer 使用前請按標簽加入無水乙醇并標示。
     c. 使用前檢查溶液S2,若有請于37℃或微波爐稍加熱溶解。S2可以在手握不燙手時使用。
     d. 溶液S2 Lysis Buffer、Buffer S4及洗脫液用后擰緊瓶蓋。
     e. 產品具有腐蝕性,注意防護。如接觸,請用大量水沖洗并及時就醫。
2.  收菌  取1~5ml過夜培養的菌液,12000rpm離心1分鐘,棄上清。
注意:一般高拷貝質粒用1-3ml菌液,低拷貝質粒用2-10ml菌液。若使用大體積菌液,請相應加大各溶液的體積。
3.  重懸菌液  將250μl溶液S1 Resuspension Buffer(已加RNase A)加入菌液沉淀,Vortex充分懸浮細菌沉淀。
    注意:請充分重懸細菌,若不充分會導致堿裂解不完全。
4.  堿裂解  將250μl溶液S2 Lysis Buffer 加入細菌重懸液,溫和地上下翻
 
轉混合6~10次,使菌體充分裂解,直至溶液變得清亮。
注意:此步請輕柔混合,劇烈混合如Vortex會導致基因組DNA斷裂,從而污染質粒DNA。
     堿裂解不宜超過5分鐘,否則會導致部分質粒DNA不可逆變性。
5.  中和  加入350μl溶液S3 Neutralization Buffer,立即輕柔地上下翻轉混合直至藍色徹底消失。室溫放置5分鐘后,室溫12000rpm離心10分鐘。
6.  去內毒素
a..將上述操作的上清液體轉移另一離心管中(忌取到沉淀),加400μl S4,振蕩混勻,
b.不時振蕩數次每次30秒。
c. 12,000 rpm,30℃離心5 min。
 d. 溶液分為兩相。上層水相含DNA,下層油狀相含內毒素。
e.將含DNA的上層水相轉移到吸附柱Spin Column中,棄層油狀相。寧肯少提上層水相,也不要不要吸到中間層。一般一次抽提就可以符合標準;也可以根據需要重復抽提2次,即重復步驟a-d兩次。
7.  柱結合 12000rpm室溫離心1分鐘,棄濾液。
9.  漂洗  將700μl的Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中,12000rpm室溫離心30-60秒,棄濾液。
10. 再漂洗  將700μl的Wash Buffer加入Spin Column中,12000rpm離心30-60秒,棄濾液。 空柱12000rpm再室溫離心2分鐘,除去殘留乙醇。
11. 洗脫  將Spin Column按置于新的潔凈的1.5ml的離心管上,在吸附柱Spin Column樹脂沉淀中央處加入50-100μl的水或洗脫緩沖液Elution Buffer,室溫靜置1分鐘,12000rpm離心1分鐘洗脫DNA,可立即用于下游分子生物學實驗或-20℃保存。
    注意:Elution Buffer 組成為2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影響測序和酶切反應,或以PH8.5的去離子水代替。把水或洗脫液加熱于60使用時有利于提高洗脫液效率,如果提取的質粒>10kb,請將洗脫液預熱至60,并適當延長洗脫時間。
質粒DNA濃度和純度檢測
   OD260值為1,相當于50ug/ml的雙鏈DNA。也可以通過DNA Marker通過瓊脂糖凝膠電泳半定量。
   OD260/ OD280比值一般為1.7-1.8,如果洗脫時不使用緩沖液,而使用去離子水,由于受PH值和離子濃度的影響,比值會偏低。
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
   

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